Среда КриоМед-Т на основе глицерина

Данный продукт предназначен для исследовательских целей.

Назначение:

Среда КриоМед-Т предназначена для суспензионного замораживания и хранения культивируемых клеток в расширенном диапазоне температур от -70^оС до -197^оС. Высокий процент выживаемости консервируемых клеток обеспечивается синергичным действием 2 типов криопротекторов. Обеспечивает эффективное сохранение рабочих партий клеточных культур в условиях низкотемпературных охлаждающих приборов (-70-80^оС) в течение 1-4 месяцев. Среда не содержит сыворотки и органических компонентов неопределенного состава. Имеет сбалансированный ионный состав.

 Инструкция по применению:

1. Взять культуру с плотностью монослоя 70-80% (для клеток прикрепляемых культур), или 50-70% плотности суспензии (для клеток суспензионных культур).

2. Снять клетки прикрепляемых культур с субстрата при помощи диссоциирующего раствора Трипсин-ЭДТА 0,05% в течение 5 минут при 37^оС (предварительно ополоснуть монослой клеток изотоническим раствором, не содержащим ионов Ca²⁺ и Mg²⁺). Клетки суспензионных культур пипетировать и собрать в центрифужной пробирке.

3. Инактивировать трипсин при помощи: среды, содержащей 2-10% сыворотки (для сывороточных культур) или рабочего раствора ингибитора трипсина из плодов сои (0,2 мг/мл) – (для бессывороточных или сывороточных культур).

4. Осадить клетки, центрифугируя 1000 об/мин 5-7 минут. Удалить супернатант, не затрагивая клеточный осадок.

5. Ресуспендировать клетки в среде «КриоМед-Т» из расчета 0,5-2,0 млн/мл.

6. Разлить приготовленную суспензию по криопробиркам, герметично укупорить замораживаемые образцы.

7. Поместить замораживаемые образцы в криоконтейнер с крышкой, можно в бокс из пенопласта и поместить его в морозильник (-40^оС) для медленного охлаждения на 1,0 – 1,5 часа.

8. Перенести бокс с образцами в морозильник глубокой заморозки (-70-80^оС) на 8-12 час или для оперативного хранения в течение 1 – 4 мес.

9. Быстро перенести образцы в жидкий азот (-197^оС) для длительного хранения.

Размораживание клеток:

•Полностью разморозить содержимое криопробирок при 37^оС.

•Мягко ресуспендировать клетки и однократно отмыть в среде культивирования или изотоническом растворе (1мл криообразца/4мл среды, раствора). Оптимально проинкубировать клетки в отмывочном растворе при комнатной температуре в течение 15 мин. Центрифугировать 1000 об/мин 5-7минут.

•Ресуспендировать клетки в среде культивирования и посадить в культуральном флаконе 25 см².

•Для максимального удаления криопротекторов рекомендуется произвести полную замену среды через 1 сутки после начала культивирования клеток. 

•При необходимости, перед пассажем оценивают количество жизнеспособных клеток в посевном материале при помощи окрашивания трипановым-синим.

Срок годности: 1 год.

Условия хранения и транспортировки:

Хранить при температуре 2 - 8 ^оС в защищенном от света месте.

Транспортировать всеми видами крытого транспорта при температуре 2- 8 ^оС.